Comparison of the effects of triamcinolone acetonide or platelet-rich plasma on expression of extracellular matrix-related genes in equine healthy chondrocytes in vitro / Comparação dos efeitos do acetonido de triancinolona ou plasma rico em plaquetas na expressão de genes relacionados à matriz extracelular de condrócitos in vitro de equinos adultos

ABSTRACT: In healthy cartilage, chondrocytes maintain an expression of collagens and proteoglycans and are sensitive to growth factors and cytokines that either enhance or reduce type II collagen synthesis. In osteoarthritis, pro-inflammatory cytokines, such as IL-6, induce overexpression of metalloproteinases (MMP) and decreasing synthesis of aggrecan. Use of chondroprotectors agents, such as Platelet-Rich Plasma (PRP) and triamcinolone (TA) are alternatives to reduce the progression of joint damage. In this study, we used chondrocytes extracted from metacarpophalangeal joints of healthy horses as the experimental model. Cells were treated in vitro with PRP or TA. No differences were observed between these treatments in comparison to the control group when the expressions of MMP9, MMP13, IL-6 and ACAN genes were evaluated (P<0.05). With these results, we can suggest that the treatments were not deleterious to equine cultured chondrocyte, once they did not stimulate MMPs and IL-6 synthesis or caused changes in ACAN.

RESUMO: Na cartilagem saudável, os condrócitos mantêm a expressão de colágenos e proteoglicanos, sendo sensíveis a fatores de crescimento e citocinas que aumentam ou reduzem a síntese de colágeno tipo II. Na osteoartrite, citocinas pró-inflamatórias, como a IL-6, estimulam a expressão de metaloproteinases (MMP) e reduzem a síntese de agrecano. O uso de condroprotetores, como o Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e triancinolona (TA) é uma alternativa para se reduzir a progressão do dano articular. Neste estudo foram usados condrócitos extraídos das articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis. As células foram tratadas in vitro com TA ou PRP. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos comparando-se com o grupo controle quanto à expressão genética de MMP-9, MMP-13, IL-6 e ACAN (p<0,05). Assim, pode-se sugerir que os tratamentos não foram deletérios ao cultivo de condrócitos, uma vez que não estimularam a síntese de MMP e IL-6 e nem causaram alterações no ACAN.

Can Triamcinolone acetonide, platelet-rich plasma, and pentosan polysulfate sodium induce oxidative stress in cultured equine chondrocytes? / Acetonido de triancinolona, plasma rico em plaquetas e pentosano polissulfato sódico podem ocasionar estresse oxidativo em cultivo de condrócitos de equinos?

ABSTRACT: Progressive deterioration and loss of articular cartilage are the final degenerative events common to osteoarthritis (OA). Reactive oxygen species (ROS) play an important role in this chondrocyte catabolic activity, leading to cell death and matrix components breakdown. Intra-articular corticosteroid injections such as triamcinolone acetonide have been used to control pain and inflammation associated with OA. New treatments for OA, platelet-rich plasma and pentosan polysulphate sodium have also been used and further investigations are necessary to determine their safety in joint cells. In this in vitro study, the use of these three substances (triamcinolone acetonide, platelet-rich plasma, and pentosan polysulphate sodium) in healthy chondrocytes did not alter the antioxidant status when compared to control groups, indicating that they could be considered safe in healthy conditions.

RESUMO: A deterioração progressiva e perda da cartilagem articular são os eventos finais da osteoartrite (OA). Espécies reativas de oxigênio (ROS) têm papel importante na atividade catabólica de condrócitos, levando a morte celular e quebra dos componentes da matriz. Injeções intra-articulares de corticosteroides, como com o acetonido de triancinolona, são usadas para controle da dor e inflamação associadas à OA. Novos tratamentos para a OA, como o plasma rico em plaquetas e o pentosano polissulfato sódico, também tem sido utilizados e necessitam de maiores investigações para determinar sua segurança para as células articulares de equinos. Neste estudo in vitro, o uso destas três substâncias (acetonido de triancinolona, pentosan polissulfato de sódio de plasma rico em plaquetas) em condrócitos saudáveis de equinos não alterou o status antioxidante quando comparado aos grupos controle, indicando que puderam ser considerados seguros em condições saudáveis.

Anesthetic recovery assisted by rope at three points in horses / Recuperação anestésica assistida por corda em três pontos em equinos

ABSTRACT: This study evaluated the quality of anesthesyc recovery of horses using a three-point assisted method. Sixty-eight horses (37 females and 31 males) of different breeds, age and weight submitted to general anesthesia for abdominal - ABD (n=15), arthroscopy - ART (n=17), other orthopedic - ORT (n=18) and miscellaneous - MIX (n=18) surgical procedures. Isoflurane resulted in shorter recovery time (67.4±25.7min) compared to halothane (88.0±37.8min). The mean duration (±SD) of anesthesia for ABD, ORT, ART and MIXgroups was 166.7 (±14), 54.9 (±5.9), 86.5 (±7.3) and 76.4 (±32.5) minutes (min) respectively. Quality of recovery wasn't influenced by duration of anesthesia or by use of analgesic, sedative and/or anesthetic drugs or not (p>0.05). Mean standing time (TEst) during anesthetic recovery was 67.5 (±29.9) min in ABD, 44.4 (±27) min in ORT, 42.2 (±23.2) min in ART and 39 (±14.7) min in MIX group. Average number of attempts (Ast) to stand was 1.8 (±0.8) in ABD group, 3.1 (±4.7) in ORT, 1.8 (±1.2) in ART and 1.8 (±1.2) in MIX. Recovery time (TRec) in ABD group was 102.2 (±36.5) min, ORT 70.1 (±36.5) min, ART 72.2 (±24.8) min and MIX group 66.6 (±19.1) min. TRec differed (p<0.05) between ABDand other groups. Three-point assisted recoveryfrom anesthesia showed to be a safe procedure during horses' recovery. This method is easy to apply and well tolerated by horses regardless of the surgical procedure.

RESUMO: Neste estudo foi avaliado a qualidade da recuperação anestésica de equinos através do método de recuperação assistida por três pontos. Sessenta e oito cavalos (37 fêmeas e 31 machos) de diferentes raças, idade e peso foram submetidos à anestesia geral para cirurgias abdominais - ABD (n=15), artroscopias - ART (n=17), demais cirurgias ortopédicas - ORT (n=18) e mistas - MIX (n=18). As anestesias realizadas com isofluorano resultaram em menor tempo de recuperação (67.4±25.7min), comparadas com as anestesias realizadas com halotano (88.0±37.8min). A média da duração (±SD) da anestesia nos grupos ABD, ORT, ART e MIX foi de 166.7 (±14), 54.9 (±5.9), 86.5 (±7.3) e 76.4 (±32.5) minutos (min) respectivamente. A qualidade da recuperação não foi influenciada pelo tempo de anestesia ou pelo uso de analgésicos, sedativos e/ou outras drogas anestésicas (p>0.05). A média do tempo para estação (TEst) durante a recuperação anestésica foi de 67.5 (±29.9) min em ABD, 44.4 (±27) min em ORT, 42.2 (±23.2) min em ART e 39 (±14.7) min em MIX. O tempo de recuperação (TRec) em ABD foi de 102.2 (±36.5) min, ORT 70.1 (±36.5) min, ART 72.2 (±24.8) min e MIX 66.6 (±19.1) min. O TRec diferiu (p<0.05) entre o grupo de cirurgias ABD e os demais. O método de recuperação anestésica por três pontos mostrou ser seguro em cavalos, sendo facilmente aplicável e bem tolerado por cavalos após diferentes procedimentos cirúrgicos.

Laminite crônica em equídeos da raça Crioula: características clínicas e radiográficas / Chronic laminitis in Criollo horses: clinical and radiographic characteristics

Este estudo visou analisar o perfil clínico e radiológico de cavalos crioulos com laminite crônica internados na Clínica de Equinos no período de 2010 a 2011. A partir das fichas de registro, avaliações clínicas diárias e estudos radiográficos, foram computados nove equinos, cinco fêmeas e quatro machos, com idade média de 8,6±5,9 anos e período médio de internação de 104,2±91,7 dias. As fêmeas representaram 55,6% (5/9) da casuística, enquanto os machos inteiros representaram 44,4% (4/9); 22,2% (2/9) dos animais apresentaram laminite nos quatro membros, enquanto 77,8% (7/9) apresentaram laminite apenas nos membros anteriores. Quanto às causas da laminite, 11,1% foram decorrentes de endotoxemia (1/9), 44,4% (4/9) de síndrome metabólica equina e, em 44,4% (4/9), não foi possível determinar a origem. Afundamento ≥20mm da terceira falange ocorreu em 66,7% (6/9) dos animais. Apenas 11,1% (1/9) dos animais apresentaram afundamento distal unilateral. Não houve correlação entre o afundamento da coluna óssea e o grau de claudicação. Dos nove animais deste estudo, 66,7% (6/9) apresentaram rotação ≥5.5° em pelo menos um dos membros. Quanto maior o grau de rotação, maior o grau de claudicação (0.1≤r<0.5; P<0.05). Dois pacientes (22,2%) foram submetidos à tenotomia do flexor digital profundo. A resistência à insulina foi a causa predisponente a laminite mais comum neste estudo. As terapias de suporte, cuidados intensivos de enfermagem, casqueamento e ferrageamento corretivos resultaram em alta taxa de sobrevivência, permitindo que, após a alta, os animais pudessem ser mantidos com conforto sem uso de medicação.

This study aimed to analyze the clinical and radiographic profile of Criollo horses affected by chronic laminitis brought to the Equine Clinic between 2010 and 2011. Medical records, daily clinical evaluations and radiographic studies were analyzed. Data of nine horses, 55.6% (5/9) females and 44.4% (4/9) intact males with a mean age 8.6±5.9 years and 104.2±91.7 days of hospitalization were included. Laminitis occurred on all four limbs on 22.2% (2/9), while 77.8% (7/9) occurred only on the forelimbs. One out of nine cases laminites was due to endotoxemia (11.1%), 44.4% (4/9) was related to equine metabolic syndrome and on 44.4% (4/9) the cause could not be determined. Sinking of third phalanx ≥20mm identified on radiographic studies occurred on 66.7% (6/9) horses. Only 11.1% (1/9) of the animals presented unilateral sinking of the third phalanx. Sinking of the third phalanx was not correlated with the degree of lameness. Rotation of the distal phalanx (≥5.5°) on at least one member was observed in 66.7% (6/9). There was a positive correlation of the third phalanx rotation degree and the lameness degree (0.1≤r<0.5; P<0.05). Two patients (22.2%) required tenotomy of the deep digital flexor tendon. Insulin resistance was the predisposing cause laminitis most common in this study. Supportive therapy, intensive nursing care, corrective trimming and shoeing provided a high survival rate after discharge so that the animals could be kept comfortable without pain medication.

Avaliação de sete protocolos para obtenção de plasma rico em plaquetas na espécie equina / Evaluation of seven platelet-rich plasma processing protocols in the equine species

O presente estudo teve por objetivo avaliar a capacidade de concentração plaquetária e sua correlação com os níveis do fator de crescimento TGF-B1, a presença de leucócitos e de hemácias nos diferentes protocolos utilizados na obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP) de equinos, através do método manual. Dez equinos, sadios, com idade média de 7 anos (±2,39), pesando em média 500kg (±67,1) foram utilizados neste estudo. Os protocolos testados variaram na velocidade e no tempo nas duas centrifugações. As variáveis analisadas nas amostras de PRP foram: concentração de plaquetas, presença de leucócitos e hemácias, e níveis de TGF-β1 quantificados pelo teste ELISA. Os protocolos testados não diferiram na capacidade de concentração de plaquetas e nos níveis de TGF-β1. Entretanto, houve diferença significava entre o protocolo I e os demais por este apresentar maior número de hemácias e leucócitos nas amostras de PRP, sendo por esse motivo considerado um protocolo inadequado para processamento do volume de sangue utilizado. Os demais protocolos podem ser utilizados para obtenção de PRP terapêutico em equinos.

PRP is plasma that contains a high numbers of platelets and growth factors in a small volume. The aim of this study was to evaluate seven different protocols to obtain PRP by the manual method according to their capacity to concentrate platelets, leukocyte and erythrocyte contamination and correlation between platelet count and TGF-β1 growth factor levels in PRP samples. Ten healthy horses with a mean age of 7 years (±2.39), weighing on average 500 kg (±67.1) were used in this study. The protocols tested varied according to the speed and time used at the two centrifugations. PRP samples were analyzed regarding platelet concentration, leukocyte and erythrocyte contamination and TGF-β1 levels quantified by ELISA. No significant differences among protocols were observed regarding the ability to concentrate platelets and TGF-β1. However, protocol I showed significantly higher erythrocyte and leukocyte counts in PRP samples than the other protocols, reason why it was considered inadequate for the volume of blood processed in this experiment. The remaining protocols are suitable for extracting PRP.